葉酸酪蛋白培養基

 

品名：葉酸酪蛋白培養基    英文： Folic Acid Casei Medium   貨號： M543   規格：100g/瓶   品牌： HiMedia   用途： 葉酸的微生物法測定

 

 

原理

葉酸測定用培養基（又名葉酸干酪培養基）采用鼠李糖乳桿菌（ATCC 7469）為測定用菌，用于葉酸的微生物法測定。該培養基是基于Flynn等人(1)的配方，并經Baker等人(2)和Waters、Mollin(3)改良。用于維生素測定的培養基通常需要三種：維持培養基、接種培養基和測定用培養基。后者通常是化學限定的培養基，包含所有測定菌生長所需的養分，但不含有待測的分子。類似的，葉酸干酪培養基包含鼠李糖乳桿菌生長所需的所有成分，但不包含葉酸。因而，添加一系列濃度增加的葉酸，會觀察到鼠李糖乳桿菌生長的遞增。

 

葉酸標準品的制備：將20mg葉酸干粉溶于含有20ml乙醇的100ml蒸餾水中。用0.1N NaOH調整溶液pH值為10.0，再用0.05N HCl調pH為 7.0。該溶液含有200mg葉酸/ml。用999ml蒸餾水稀釋1ml該溶液，則濃度為200ng/ml。再用999ml葉酸緩沖液A（貨號M544）稀釋1ml該溶液，則為0.2ng/ml的葉酸標準溶液。每管取0,0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0和5ml該溶液，配置即告完成。

樣本葉酸濃度的測定步驟：如前所述使用0.5,1.0,1.5ml或其他體積的制備好的血清提取物。加入5ml葉酸干酪培養基和足量的蒸餾水，使每個試管的總體積為10ml。15磅121°C滅菌5分鐘。冷卻試管并向每個試管中加入一滴接種液。35-37℃孵育18-24小時后進行濁度讀數。讀數前將試管冷藏15-30分鐘以停止細菌生長。620nm檢測吸光度。待測樣品中的葉酸含量應根據標準曲線來確定，不過要考慮樣品稀釋度。

 

葉酸干酪培養基用于葉酸的微生物法測定。鼠李糖乳桿菌（ATCC 7469）為測定用菌。

產品工藝及質量均通過了ISO9001、ISO13485、WHO-GMP、CE和FDA認證

 

最終pH值：(25°C)   6.7±0.1

 

質量控制

1、外觀——米黃色至黃色均一自由流動粉末

2、制備好的培養基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀

3、配比濃度——在25°C下9.4%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值為6.7±0.1

4、pH值——6.60-6.80

 

配置

稱取9.4g干粉培養基溶于100ml蒸餾水，加入50mg抗壞血酸。加熱至沸騰使培養基完全溶解。測定時，分裝至每管為5ml培養基（包含標準品和待測樣品）。加蒸餾水，使總體積達到10ml。高壓消毒15磅121°C 5分鐘。立即冷卻。

 

培養反應

采用鼠李糖乳桿菌（ATCC 7469）進行葉酸的微生物法測定。35-37°C孵育16-18小時。

 

生長狀況

可獲得良好的生長。隨著測定管葉酸標準品濃度升高（即 0, 0.1,0.2, 0.4, 0.6, 0.8,1ng），鼠李糖乳桿菌生長逐漸遞增，伴隨著620nm處吸光度的增加。

 

參考文獻

1. Flynn,Williams, ODell and Hogan, 1951, Anal. Chem., 23, 180.

2. Baker, Herbert,Frank, Pasher, Hunter, Wasserman and Sobotka, 1959,Clin. Chem., 5, 275.

3. Waters and Mollin,1961, J. Clin. Path., 14, 335.